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来源: 摩贝原创 2021-12-07
聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种在生命科学实验室中几乎普遍使用的技术。通常是用来分离蛋白质的。那么今天我们就来了解下聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。
一、聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理
1.有几种类型的电泳技术可供使用，但最常见的是SDS-PAGE。在SDS-PAGE中，洗涤剂十二烷基硫酸钠用于使蛋白质变性并使它们的质荷比正常化。如果没有SDS，蛋白质的分子量和电荷都会影响其在凝胶中的分离。使用SDS，只有分子量会影响迁移速度，因此样品据此分离。
2.凝胶基质
我们使用一种叫做聚丙烯酰胺来电离产品，影响蛋白质迁移的凝胶基质。改变凝胶中聚丙烯酰胺的百分比可以让我们改变凝胶中孔的大小，这意味着我们可以在不同百分比的凝胶中分离不同大小的蛋白质。
通常，凝胶分两部分倒入。第一部分是分离凝胶，其pH值约为8.8，可减缓蛋白质的迁移。在分离胶上方，倒入pH值为6.8且孔径较大的浓缩胶。这种堆积胶的作用是将蛋白质样品压缩成一个薄的迁移前沿，使样品中的所有蛋白质同时到达分离胶，从而实现准确的相对迁移。
3.运行凝胶
SDS-PAGE凝胶使用浇铸装置垂直浇铸。我们以这种方式浇注凝胶。储罐有一个内（或上）缓冲室和一个外（或下）缓冲室。这两个腔室由凝胶连接起来，形成一个连续的回路。每个腔室包含电极，内腔为负极，外腔为正极。内腔接触凝胶的顶部，当施加电场时，由于SDS分子的负电荷，蛋白质将朝着外缓冲室中的正极移动。
然后通过凝胶的移动速度由电压梯度，即电极之间的电压决定。
4.可视化蛋白质
迁移后，必须可视化蛋白质以确定它们的长度和丰度。有几种常用的方法来可视化特定或非特定的蛋白质。非特异性蛋白质可视化针对所有蛋白质，使用与蛋白质常见区域（如氨基）结合的染料。
为了专门可视化某些蛋白质，我们需要使用抗体。抗体识别蛋白质中独特的3维结构以将它们与其他结构区分开来。通过将抗体与染料或酶结合，我们可以仅可视化它识别的蛋白质。将蛋白质从凝胶转移到可以用抗体探测的膜的过程称为蛋白质印迹。
以上就是聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理，你们get了吗？
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